pcRچیست؟

Polymerase Chain Reaction

ü تکنیکی آزمایشگاهی برای تکثیر اختصاصی توالی های اسید نوکلئیک
ü کری مولیس ۱۹۸۷
ü انقلاب علوم بیولوژی مولکولی

اصول

ü تک رشته ای شدن و اتصال مجدد

مراحل

ü تک رشته ای شدن

ü اتصال

ü تکثیر

استاندارد مواد در واکنش های PCR:

۱-Thermostable DNA Polymerase Enzyme ; ( ۰,۵-۲ u)

۲-Dinucleoside Threephosphates (dNTPs) (۱۰۰-۲۰۰ ųM of each /ml)

۳-MgCl۲ ; Cofactor for DNA polymerase (۰,۵-۵ mM/ml)

۴-Buffer;

۱۰ mM Tris-HCl pH=۸,۳ (۲۵ °C) ۵۰ mM KCl

۱,۵ mM MgCl۲ ۰.۰۱ % Gelatin

۵- Template ; (< ۱pg- ۱۰۰ ng)

۶- Primer; (۰,۱-۱ ųM/ml)

ترکیب مواد در واکنش های PCR:

PCR Buffer ۱۰X: ۲ µl

• Each dNTPs: ۲۵۰ µM

• MgCl۲: ۲ mM

• Each Primer: ۰,۵ µM

• Taq DNA Polymerase: ۱ U

• Target DNA: ۱ µl (۱۰۰ ng)

تکنیک های ملوکولی pcr چیست

   وسیله تکثیر:

ü دستگاه ترموسایکلر

برخی از روشهای PCR:

• Hot-Start PCR

• Nested-PCR

• ARMS-PCR (Amplification Refractory Mutation System)

• Multiplex PCR (Co-Amplification)

• Touchdown PCR

• PCR-SSCP

• PCR-RFLP

• AND …

برخی کاربردهای PCR:

ü تولید انبوه از قطعه مورد نظر (تولید ماده اولیه برای سایر آزمایشات)

ü تعیین ژنوتیپ (PCR-RFLP, PCR-SSCP, ARMS-PCR)

ü تشخیص بیماریهای ژنتیکی و عفونی

آزمایشگاه بیوتکنولوژی

۱) بخش بیو انفورماتیک

۲) بخش عملیات میدانی (جمع آوری نمونه)

۳) بخش استخراج DNA

۴) بخش PCR

۵) بخش الکتروفورز

۶) بخش نرم افزار (تحلیل داده ها)

۷) بخش ضد عفونی (استفاده از اشعه U.V)

کاربردهای PCR در دامپزشکی

ü تشخیص بیماری هایی از قبیل سل، یون، تب مالت، آنفولانزای حاد پرندگان و … .

ü تشخیص تقلبات گوشت چرخ کرده، سوسیس و کالباس (استفاده از روش Multiplex PCR)

ü تشخیص تقلبات پودر ماهی

ü تشخیص سویه های جدید و بومی بیماریزا

روشهای مولکولی

ü مبتنی بر توالیهای اختصاصی DNA

ü لزوم شناسایی توالیهای اختصاصی در ژنومMap

ü مزایای PCR:

ü سرعت عمل

ü عدم نیاز به انجام آزمایش تأییدی (دقت بیشتر)

ü هزینه کم تر